bouture D'UNE PLANTE A PARTIR D’UN EXPLANT FOLIAIRE

par **Anonymous** » 23 Fév 2004, 06:37

matinal ce matin bonne journée a tous

je v vous monter comment réaliser une bouture avec un cm carré de feuille g trouvé sa sur le net j'en avai de vague souvenir d'école. cette méthode donne des résultats impressionants en 1 seule petite semaine.

REGENERATION D'UNE PLANTE A PARTIR D’UN EXPLANT FOLIAIRE

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Préparation du milieu de culture
Prélever stérilement 10 mL de chacune des deux solutions minérales complètes (macroéléments et oligoéléments) dans une fiole jaugée de 200 mL et compléter à 200 mL avec de l’eau distillée.

Placer 6 g de glucose et 1.3 g d’agar dans un ballon de 300 à 500 mL et verser la solution précédente dans le ballon.

Passer le ballon au four à microondes pour dissoudre l’agar en surveillant pour éviter les projections.

Laisser refroidir jusqu'à 40 à 50°C et verser le milieu dans des petits pots sur une hauteur de 2 à 3 cm en faisant attention de ne pas faire couler de milieu sur les parois.

Ajouter éventuellement dans un flacon de l’auxine (1 mg.L-1), dans un autre de la kinétine (1 mg.L-1), dans un autre un mélange d’auxine (1 mg.L-1) et de kinétine (0.5 mg.L-1).

Préparer des bouchons de coton cardé pour chaque pot et les recouvrir d’un morceau de papier d’aluminium.

Autoclaver les flacons contenant le milieu. Commencer la préparation de la suite des opérations pendant l’autoclavage. Dès qu’il est terminé, sortir les flacons et les laisser refroidir.

Préparation de la zone de travail

Nettoyer à l’eau de Javel le plan de travail autour d’un bec bunsen.

Préparer un flacon d’alcool avec un couvercle, des pinces, un scalpel, une boîte de Pétri stérile en verre, un flacon d’eau de Javel diluée et 3 flacons d’eau stérile.

Préparation des explants

Enlever hors du plan de travail les deux premières couronnes de feuilles d’une endive.

Toutes les opérations suivantes doivent être menées en conditions stériles.

Dans la zone de travail stérile, enlever trois autres couronnes de feuilles avec les pinces stérilisées (tremper l’extrémité dans l’alcool, la passer à la flamme et laisser refroidir) et les jeter.

Prélever une feuille, la tremper dans l’eau de Javel pendant 5 minutes et la rincer dans 3 bains successifs d’eau stérile.

Placer la feuille dans la boîte de Pétri stérile. En tenant la feuille au fond de la boîte avec les pinces stérilisées, découper un fragment rectangulaire de 2 cm x 0.5 cm verticalement dans la partie médiane de la feuille. Couper l’extrémité apicale en biseau.

Mise en culture

Récupérer les flacons de milieu refroidis et les apporter dans la zone de travail.

Enfoncer un explant par sa face plane au centre du milieu de culture (l’enfoncer à mi hauteur).

Remettre le bouchon de coton et le papier d’aluminium. Etiqueter le flacon.

Solution 1 : macro-éléments (g/L)
Nitrate d’ammonium 1,65 g
Chlorure de calcium 0,44 g
Sulfate de magnésium 0,37 g
Nitrate de potassium 1,9 g
Phosphate monopotassique 0,17 g

Solution 2 : micro-éléments (g/L)
Sulfate de fer 27,85 mg
EDTA dissodique 37,25 mg
Sulfate de manganèse 22,30 mg
Sulfate de zinc 8,6 mg
Acide borique 6,2 mg
Iodure de potassium 0,83 mg
Molybdate de sodium 0,25 mg
Sulfate de cuivre 0,025 mg
Chlorure de cobalt 0,025 mg

par **Anonymous** » 23 Fév 2004, 08:14

Elle est bien bonne celle la !
Avant de vouloir faire de la reproduction in vitro; il serait peut être important de savoir cultiver la plante et éventuellement la bouturer correctement !
Mais libre a chacun d'installer un laboratoire dans son appartement ou sa maison !
Déja que pour doser correctement il va falloir une balance des plus précise mais alors d'ici a ce qu'il aie une personne qui aie compris le systeme et que cette même personne arrive a le concrétiser ! Il y aura de l'eau qui sera passée sous les ponts !
:roll:

Bon amusement et bonne chance quand même au volontaire ambitieux !

par **Anonymous** » 23 Fév 2004, 18:56

nuiocman a écrit:Elle est bien bonne celle la !
Avant de vouloir faire de la reproduction in vitro; il serait peut être important de savoir cultiver la plante et éventuellement la bouturer correctement !
Mais libre a chacun d'installer un laboratoire dans son appartement ou sa maison !
Déja que pour doser correctement il va falloir une balance des plus précise mais alors d'ici a ce qu'il aie une personne qui aie compris le systeme et que cette même personne arrive a le concrétiser ! Il y aura de l'eau qui sera passée sous les ponts !
!

Je ne pense pas qu'il soit necessaire de savoir buturer une plante pour réussir avec cette méthode ton seule énemis sera les microbes. Tu as un protocole a suivre c over simple. pour ce qui est du matos il te faut une balance un peu précise c vrai, mais qui n'a pas sa chez lui. Perso g opté pour une digitale acheté a dam mais les vielles balances de la poste sont ultra précise systéme avec des poids. pour ce qui est des proportions tu peu tout multiplier par 10, 100, ou 1000. Je pense que la balance est le seule investissement pour le matos et pour te dire a l'école nous a donné un papier avec le protocole a suivre et la classe a obtenu 95% de réussite (on avait tous15 ans). Je pense de plus en plus a utiliser cette methode vu l'état de mais boutures en terres aprés 15 jours je vous tient au courrant mais je ne peut pas vous montrer tout sa je n'st pas d'appareil foto. pour ceux qui veule ce lancer il ne faut pas souffler sur le coin de taf sous peine d'introduire des germes et cultiver du pourrissement voila et @+

par **Anonymous** » 23 Fév 2004, 21:11

pour le matos de labo http://www.bioblock.com
pour tout sa :
Chimie : produits chimiques et réactifs pour la recherche et le contrôle.
Microbiologie : ingrédients, milieux et réactifs pour le contrôle et la recherche.
Consommables http://www.fr.fishersci.com/
voilou
@+

par **Anonymous** » 24 Fév 2004, 00:05

mais si tu savais comme sa marche

par **Anonymous** » 24 Fév 2004, 03:20

mouais en 30 jrs avec un matos de ouf et des recettes assorties....
Alors qu' il 10 jrs pour bouturer, je vois vraiment pas l' intéret de se prendre la tronche avec ça, non ?!?? :?:

c' est vrai que ça existe, le vélo aussi, mais moi je préfère mon auto... :mrgreen:

par **Anonymous** » 24 Fév 2004, 07:10

ça peut être rigolo...
faire des plantes à partir d'un chicon, j'aurai tout vu :ptdr:

par **Anonymous** » 24 Fév 2004, 09:50

je connaissais pas, vraiment interrescent

par **Anonymous** » 24 Fév 2004, 10:51

excellent post :wink:

mais petit bénol... la reproduction in vitro necessite un nettoyage violent de l'echantillon végétal. Peu de plante resiste à ce traitement. De plus les tiges ne permettent pas cette opération. par contre, une graine... :wink:

à la condition de vraiment maitriser l'opération :!:

J'attends impatiament de voir des photos

par **Anonymous** » 24 Fév 2004, 15:31

voila sinon just un ti message pour vs dire que sur http://www.bioblock.com il y a un testeur de ph digiatal a 33.10 E quand on voit le prix en grow shop c peut etre une affaire. Par contre il faut bien chercher les premier prix c du matériel de labo il y a de ph metre a 1200 E ils ont vraiement une gamme trés vaste g le catalogue a la maison qui est plus épais que le larousse en version intégrale.

mrd g chié le lien dc rééditer
voila
@+

par **Anonymous** » 24 Fév 2004, 15:45

C'est très simple a faire, faut juste le matos.
Ce n'est jamais qu'une recette de cuisine adapté à la sauce horticole.
Très efficace mais pourquoi faire compliquer quand on peut faire simple.
Même si tu maitrises l'in vitro , ca ferait plaisir que tu réussisse déjà une bouture à "l'ancienne" :wink:

par **Anonymous** » 24 Fév 2004, 19:04

hum pour info j ai pas rouve le phmetre a 33.10 euro et pourtant j ai cherche pas mal de temps :mrgreen:

ben vi surtout qu j aurais aime voir un peu si il etait different de ceux que je peus avoir a 40 euro precision de 0,1ph de marque hanna

par **Anonymous** » 24 Fév 2004, 20:47

g le catalogue 2004 tu peut le recevoir gratuitement ss 48 h par livreur. Pour le PHmetre a 33.10 c un stylo PH de nom "testeur PH avec électrode S7" ref "F93457". et précision 0.01
hum comme tu dis booker..

par **Anonymous** » 25 Fév 2004, 00:09

ben voilou voila j ai trouve sur le site avec la reference que tu as donne donc le hum etais bien de circonstance pour info c le pH-mètre Checker 1 de chez hanna
primo il est pas a 33.10 comme tu l affirmes mais a 34,61 bon allez on va pas chipoter pour si peux comme tu pourrais le dire mais dans ce cas la je prefere l acheter par mon plan parce que je le paye que 34,50 frais de port gratos et si j arrive a une commande de 5 la je le touche a 32,90
secondo et la on chipote plus tu dits precision de 0.01
:lol:

en fait il est precis a +/- 0.2 on est bien loin du 0.01 je donne le lien pour verif si tu as des doutes biensur http://193.132.123.103/bi/pdf/b04p1334.pdf
c pas une erreur car moi aussi sur ma doc direct de chez hanna il est donne pour les meme caracteristique voila voilou
Donc encore une fois tu comprends le pkoi du hum :twisted:

par **Anonymous** » 25 Fév 2004, 03:08

pour la diférance ct un prix ht et pour la précision :lol:

comme tu dis booker
et pour ton lien je suis preneur merci
tchusssss